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      Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒10186ES50
      Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒10186ES50
      • Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒10186ES50

      Animal Blood Direct PCR Kit (With Dye) 全血直接PCR試劑盒10186ES50

      產品報價:245元

      更新時間:2019/11/12 17:33:41

      地:上海

      牌:翊圣生物

      號: 10186ES50

      廠商性質: 生產型,貿易型,服務型,

      公司名稱: 上海翊圣生物科技有限公司

      產品關鍵詞: Taq DNA聚合酶   全血直接PCR試劑盒   PCR擴增  

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      翊圣生物 : (13916792673) (400-6111-883)

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      產品信息

      產品名稱

      產品編號

      規格

      價格(元)

      Animal Blood   Direct PCR Kit (With Dye)  全血直接PCR試劑盒

      10186ES50

      50 T

      245.00  

      Animal Blood   Direct PCR Kit (With Dye)  全血直接PCR試劑盒

      10186ES70

      200 T

      565.00  

      產品描述

      全血直接PCR試劑盒是一款可以直接對全血樣本進行PCR擴增的試劑盒,無需DNA提取或樣品處理,大大降低了污染風險,縮短了檢測時間。

      試劑盒中包含配方優化的2× Blood Master Mix,具有很強抑制物耐受性,人血的模板最大加入量可達45%,鼠血的可達20%,可以靈敏的擴增血液樣本中基因組和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分,擴增產物末端加A,適用于Hieff Clone?快速克隆試劑盒(貨號10907ES60/10908ES60)。

      該試劑盒可用于直接擴增的血樣類型包括:新鮮血液、4貯存血液、冷凍血液以及儲存在Whatman 903?FTA?商用卡上的干血漬,且兼容所有常規抗凝劑(EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。適用樣本來源包括人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血等。

      產品組分

      編號

      組分

      產品編號/規格

      10186ES5050   T

      10186ES70200   T

      10186-A

      2× Blood Master Mixa

      500 μL

      1 mL× 2

      a2× Blood Master Mix包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑等,產品已混合溴酚藍染料(不含SDS),PCR產物可以直接進行電泳。

      運輸和保存方法

      冰袋運輸。-20保存。避免反復凍融。

      操作方法

      1. PCR反應體系配制

      組分

      體積(μL

      體積(μL

      終濃度

      2× Blood Master Mix

      10

      25

      1×

      Forward Primer (10 μM)

      0.5

      1

      0.2 μM

      Reverse Primer (10 μM)

      0.5

      1

      0.2 μM

      抗凝全血

      X

      X

      -

      ddH2O

      To 20

      To 50

      -

      】:使用前務必充分混勻,避免劇烈震蕩產生過多氣泡。

      a模板使用量:進行基因組上的目的片段檢測,建議使用少量的血液量作為模板;檢測血液樣本中某種病毒或細菌等的目的片段,建議擴大PCR體系并使用較大量的血液模板。血液模板最多占PCR體系的45%(人血)、20%(鼠血)。若模板使用含有血液的采集卡,可截取直徑1-4 mm的血點,直接加入20-50 μL PCR反應體系進行擴增。

      b引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據情況在0.1-0.5 μM之間進行調整。

      c反應體系:推薦使用20 μL 50 μL,以保證目的基因擴增的有效性和重復性

      d體系配制:配制好PCR反應體系,置于渦旋儀上渦旋混勻,瞬時離心將反應液集于管底。

      2. PCR反應條件設置

      循環步驟

      溫度

      時間

      循環數

      預變性

      95

      5 min

      1

      變性

      95

      10 sec

      30-40

      退火

      5065

      20 sec

      延伸

      72

      30 sec/kb

      終延伸

      72

      5 min

      1

      】:a預變性955 min可以讓白細胞裂解,釋放可用于PCR擴增的基因組DNA。請勿縮短時間或降低溫度。

      b退火溫度:退火溫度設置為引物Tm值即可。然而,使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增,并提高全血模板的擴增效率。因此,如擴增產物特異性較差,可以建立一個溫度梯度反應去尋找引物模板最適退火溫度。

      c延伸時間:按30 sec/kb設定,如不足30 sec,設置30 sec即可。

      d擴增循環數35個循環已可以擴增足量產物。太多的循環將會導致非特異性擴增增加。

      3. 擴增產物分析

      PCR完成后,建議將反應液于1000× g (大約4000 rpm) 離心13 min以沉淀血細胞碎片,之后取上清進行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當使用高濃度血液模板時此步尤為重要,因為經過PCR循環,反應管中會存在大量的血細胞碎片。這些碎片會干擾下游的檢測,如瓊脂糖電泳檢測。注意:由于血液本身的原因,PCR 結束后在 PCR 管的底部會出現透明凝膠狀物質,此為正常現象。

      4. 對照反應

      PCR結果分析時,不管是陽性結果或陰性結果,如果沒有對照反應,都不能確定結果是否可靠。為了便于后續實驗結果的分析,建議在進行PCR時,設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

      4.1 陽性對照反應體系

      組分

      體積(μL

      體積(μL

      終濃度

      2× Blood Master Mix

      10

      25

      1×

      Forward Primer (10 μM)

      0.5

      1

      0.2 μM

      Reverse Primer (10 μM)

      0.5

      1

      0.2 μM

      模板DNA

      X

      X

      100-200 ng

      ddH2O

      To 20

      To 50

      -

      】:a模板DNA:選用樣本純化的DNA

      b引物的選擇:建議選擇該樣本較易擴增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。

      4.2 陰性對照

      PCR反應體系被污染會導致PCR結果出現假陽性,需要設置陰性對照來排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O進行PCR擴增;另取ddH2O作為模板,用目的基因引物進行PCR擴增,以排除PCR體系是否被污染和實驗是否有其他污染源。

      注意事項

      1. 盡量使用新鮮抗凝血。若凍存血,應避免反復凍融。

      2. 解凍后2× Blood Master Mix可能出現渾濁,冰上放置1-2 min,待溶液澄清后,上下顛倒混勻,不影響試劑性能。

      3. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率最佳。

      4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


      常見問題與解決方法

      常見問題

      可能原因

      解決方法

      陽性對照、待測樣本均無條帶。

      PCR反應體系或反應條件不合適。

      使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。

      PCR試劑保存不當失去活性。

      2× PCR Mix應保存于-20,使用時避免反復凍融。若使用頻繁,可在4短時間存放。

      引物設計問題。

      嘗試重新設計引物進行檢查。

      陽性對照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱。

      血液樣本保存不當,基因組DNA降解。

      抗凝全血可在4℃保存2-8天,需長時間保存可將樣本置于在-20℃或-70℃凍存,并避免反復凍融。

      模板加入量不適合。

      可在PCR體系10%-30%范圍內優化血液加入量;若是擴增血液樣本中的病毒或細菌DNA片段,可將模板量增加至30%-40%

      PCR循環數不足。

      適當增加PCR的循環數,推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜,一般PCR反應要比用純化的   DNA模板多5-10個循環為佳。

      非特異性擴增

      PCR退火溫度太低,循環數、引物濃度或模板濃度太高。

      增加PCR退火溫度,降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。

      PCR引物錯配。

      重新設計PCR引物。

      配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。

      PCR反應體系的配制在低溫下進行,配制完成后盡快進行PCR擴增反應。

      陰性對照出現目的條帶

      操作工具或試劑污染。

      實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

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      產品名稱

      貨號

      規格

      價格(元)

      Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒

      10180ES50/70

      50/200 T

      326/755

      Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒HOT

      10181ES50/70

      50/200 T

      326/755

      Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

      10182ES50/70

      50/200 T

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      Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒HOT

      10183ES50/70

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      10184ES50/70

      50/200 T

      245/565

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      10185ES50/70

      50/200 T

      245/565

      Plant Tissue PCR Kit  (With Dye) 植物組織直接PCR試劑盒

      10187ES50/70

      50/200 T

      245/565

      HB190220

       

       




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