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      動物組織直接PCR試劑盒10184ES50
      動物組織直接PCR試劑盒10184ES50
      • 動物組織直接PCR試劑盒10184ES50

      動物組織直接PCR試劑盒10184ES50

      產品報價:433元

      更新時間:2019/11/12 17:33:41

      地:上海

      牌:翊圣生物

      號: 10184ES50

      廠商性質: 生產型,貿易型,服務型,

      公司名稱: 上海翊圣生物科技有限公司

      產品關鍵詞: 動物基因分型   轉基因型鑒定   動物組織直接PCR試劑盒   PCR擴增  

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      產品信息

      產品名稱

      產品編號

      規格

        價格(元)

      Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接PCR試劑盒

      10184ES50

       50 T

           433.00

      Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接PCR試劑盒

      10184ES70

       200 T

           1453.00

      產品描述

      動物組織直接PCR試劑盒是一款可直接對不同動物組織進行PCR擴增的試劑盒,適應性廣、穩定性強、操作簡易。

      本試劑盒采用獨特的裂解緩沖液體系,可以快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組DNA,如昆蟲足翅、鼠尾、鼠趾、動物皮膚和內臟等。裂解產物可以用于DNA提取純化、也可以直接用于PCR反應、也可以在-20℃或以下溫度條件下長期保存備用。

      本試劑盒中提供的Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很強的擴增兼容性,不需要額外采用純化提取試劑去除裂解產物中的各種殘骸雜質,能直接以待測樣品裂解液為模板,進行高效特異性擴增。該試劑為2倍濃縮PCR反應混合液,包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分,大大簡化擴增步驟的操作過程,降低污染幾率。

      該試劑盒可用于動物基因擴增檢測、轉基因動物基因型鑒定等。

      產品組分

      編號

      組分

      產品編號/規格

      儲存

      10184ES5050 T

      10184ES70200 T

      10184-A

      Lysis Buffer

      10 mL

      20 mL × 2

      室溫或4℃

      10184-B

      Proteases

      100 μL

      400 μL

      -20℃

      10184-C

      2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)

      500 μL

      1 mL×2

      -20℃

      aLysis Buffer Proteases兩種組分配合使用于動物組織裂解;

      b2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含PCR擴增所需要的熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTPMg2+等;已混有溴酚藍染料作為電泳指示劑, PCR產物可以直接進行電泳。

      運輸方法

      冰袋運輸。

      保存方法

      1. 試劑10184-ALysis Buffer】為動物組織裂解緩沖液,在常溫下,可保存12個月。

      2. 試劑10184-BProteases】為動物組織裂解劑,使用時請勿長久開蓋,建議保存于-20℃,避免反復凍融

      3. 試劑10184-CTissue Direct PCR Mix (With Dye),建議保存于-20℃,避免反復凍融。


      操作方法

      樣品基因組DNA釋放

      1. 在離心管中加入200 μL Lysis Buffer2 μL Proteases,輕輕渦旋混勻;

      2. 取約10 mg動物組織,置于上述離心管中,輕輕渦旋混勻。

      3. 55℃孵育5-30 min,然后95℃處理10 min

      4. 12000 rpm離心5 min

      5. 將上清轉移至新的離心管,4℃-20℃保存或直接用于PCR擴增。

      】:aLysis BufferProteases混合后盡快使用,不宜長期保存;大量樣本操作時,可以將Lysis BufferProteases100 μL:1 μL的比例混勻備用。

      b)組織應取少量并盡量剪碎,以便裂解反應更順利進行;鼠尾組織可以取1-5 mm;皮膚內臟等可以取約一粒米大小碎塊。

      c55℃孵育,一般5 min即可滿足多數PCR需求,如鼠尾、鼠耳等組織;若需要的DNA量較大或樣品較難裂解,可將時間延長至30 min或更久;組織塊不需完全裂解,殘余的部分在后續離心步驟中可被除去。

      PCR反應鑒定——PCR反應體系

      組分

      體積(μL

      終濃度

      2× Tissue Direct PCR Mix(With Dye)

      10

      Forward Primer (10 μM)

      0.5

      0.25 μM

      Reverse Primer (10 μM)

      0.5

      0.25 μM

      裂解產物(DNA模板) 

      1

      -

      ddH2O

      To 20

      -

      】:各組分使用前應充分混勻。

      a模板使用量:建議1-10%總體系。避免超過總體系的20%

      b引物終濃度推薦使用0.2-0.25 μM。反應性能較差時,可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度。

      c反應體系:推薦使用20 μL,以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

      d體系配制:配制好PCR反應體系,置于渦旋儀上渦旋混勻,瞬時離心將反應液集于管底。

      e對照反應:建議進行PCR時,設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

      PCR反應鑒定——PCR反應條件

      循環步驟

      溫度

      時間

      循環數

      預變性

      94℃

      5 min

      1

      變性

      94℃

      5 sec

      35推薦25-40

      退火

      50-65℃

      5 sec

      延伸

      72℃

      5 sec

      終延伸

      72℃

      5 min

      1

      【注】:a退火溫度:請參考引物的理論Tm 值,退火溫度可設置低于引物理論值5℃,或通過梯度PCR確定最佳溫度;

      b延伸時間:需要根據片段的長度來確定,對于1 kb以內的DNA片段,建議延長時間為5 sec;對于1 kb及以上

      的片段可以按15 sec/kb設置延伸時間。

      注意事項

      1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率;

      2. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率最佳;

      3. 本試劑盒僅供經過科研訓練的實驗人員使用,非實驗人員或未經相應培訓的人員請在監管下使用,勿獨自使用;

      4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護性措施進行實驗操作。


      常見問題與解決方法

      常見問題

      可能原因

      解決方法

      陽性對照、待測樣本均無條帶。

      PCR反應體系或反應條件不合適。

      使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。

      PCR試劑保存不當失去活性。

      2× PCR Mix應保存于-20℃,使用時避免反復凍融。若使用頻繁,可在4℃短時間存放。

      引物設計問題。

      嘗試重新設計引物進行檢查。

      陽性對照有目的條帶,待測樣本無條帶或條帶弱。

      不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。

      使用新鮮的試劑。

      加入組織裂解液過量。

      增大反應體系,或減少裂解液的用量。

      樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久,DNA基因組已經降解。

      裂解混合液液可在4℃保存2-3天,盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR

      模板加入量不適合。

      在反應體系10-20%范圍內優化模板加入量。反應效性能較差時,可以降模板濃度調節到低于10%的范圍。

      PCR循環數不足。

      適當增加PCR的循環數,推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜,一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環為佳。

      非特異性擴增

      PCR退火溫度太低,循環數、引物濃度或模板濃度太高。

      增加PCR退火溫度,降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。

      PCR引物錯配。

      重新設計PCR引物。

      配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。

      PCR反應體系的配制在低溫下進行,配制完成后盡快進行PCR擴增反應。

      陰性對照出現目的條帶

      操作工具或試劑污染。

      實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。

      樣本間交叉污染。

      每個取樣器只對一個樣本使用;或取完一個樣本后,將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中,反復涮洗,然后用干凈的紙巾擦干殘液。

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      產品名稱

      貨號

           規格

       價格(元)

      Animal Tissue Direct PCR Kit 動物組織直接PCR試劑盒

      10180ES50/70

      50/200 T

        383/1353

      Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒HOT

      10181ES50/70

      50/200 T

        293/883

      Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

      10182ES50/70

      50/200 T

        293/883

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        323/983

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       50/200 T

        323/983

      Plant Tissue PCR Kit  (With Dye) 植物組織直接PCR試劑盒

      10187ES50/70

       50/200 T

       393/1353

      HB190710

       

       




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